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摘 要 隨著寵物飼養(yǎng)數(shù)量的不斷增加，寵物食品的質(zhì)量安全備受關(guān)注。霉菌毒素作為影響寵物食品質(zhì)量的重要因素之一，對(duì)寵物的健康具有潛在威脅。綜述了寵物食品中常見(jiàn)霉菌毒素的種類及危害，闡述了目前主要的檢測(cè)技術(shù)及其優(yōu)缺點(diǎn)，并對(duì)國(guó)內(nèi)外寵物食品中霉菌毒素的污染及監(jiān)管現(xiàn)狀進(jìn)行了總結(jié)。

關(guān)鍵詞寵物食品；霉菌毒素；檢測(cè)技術(shù)；污染現(xiàn)狀；監(jiān)管體系

近年來(lái)，寵物市場(chǎng)快速發(fā)展，寵物食品的安全性成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。霉菌毒素污染是寵物食品行業(yè)面臨的重要問(wèn)題之一，不僅影響寵物的健康，也關(guān)系到寵物食品行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。了解寵物食品中霉菌毒素的監(jiān)測(cè)方法與污染現(xiàn)狀對(duì)保障寵物健康具有重要意義。

1 寵物食品中主要的霉菌毒素種類及危害

以犬、貓飼糧為主的寵物食品主要有干糧（水分含量5%~12%）、半濕糧（水分含量22%~35%）和濕糧（水分含量>65%）3種形式，其中，寵物干糧由于便于儲(chǔ)存和喂養(yǎng)，在寵物食品行業(yè)中占據(jù)較大份額。寵物干糧是一種營(yíng)養(yǎng)均衡的飼料，主要組成包括玉米、小麥、大米等谷物產(chǎn)品和雞肉、魚肉等動(dòng)物蛋白。因此，與谷物產(chǎn)品類似，寵物食品中較常出現(xiàn)的霉菌毒素包括黃曲霉毒素（Aflatoxin， AF）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol， DON）、伏馬毒素（Fumonisin， FB）、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A， OTA）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone， ZEA）。

多數(shù)有關(guān)霉菌毒素含量污染的調(diào)查都是基于寵物干糧樣品進(jìn)行的。與肉用動(dòng)物相比，寵物具有獨(dú)特的伴侶特性，因此，寵物食品的安全性以及寵物食品中污染物對(duì)寵物健康的潛在危害也更引人關(guān)注。AFs是由黃曲霉或寄生曲霉產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，在寵物食品中已檢測(cè)到4種天然AFs，包括AFB1，AFB2，AFG1和AFG2，其中AFB1致病性最強(qiáng)，AFs常見(jiàn)于玉米、花生、棉籽、牛奶和堅(jiān)果中。當(dāng)犬?dāng)z入被AFs污染的飼糧時(shí)，霉菌毒素被十二指腸吸收，進(jìn)入血液與血漿白蛋白結(jié)合，通過(guò)血流運(yùn)輸進(jìn)入肝臟。AFB1在肝臟中可轉(zhuǎn)化為有毒的環(huán)氧化物，與DNA、RNA和蛋白酶發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致肝功能異常、肝臟腫大等，甚至引發(fā)肝癌。

DON主要由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生，是常見(jiàn)于谷物和動(dòng)物產(chǎn)品中的B型單端孢霉烯族化合物，也稱為“嘔吐毒素”。DON理化性質(zhì)穩(wěn)定，在寵物食品加工過(guò)程中較難消除。DON暴露可能會(huì)導(dǎo)致不良影響，包括體增重減少、神經(jīng)內(nèi)分泌變化以及通過(guò)干擾蛋白質(zhì)合成影響寵物的免疫系統(tǒng)等。研究表明，巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞對(duì)DON暴露敏感，DON的劑量和暴露時(shí)間不同，可能對(duì)機(jī)體的免疫功能產(chǎn)生刺激或抑制作用，一般來(lái)說(shuō)，低劑量DON可以誘發(fā)炎癥反應(yīng)，高劑量DON可以誘發(fā)免疫抑制，長(zhǎng)期DON暴露具有免疫抑制作用。

OTA由曲霉屬和青霉屬產(chǎn)生，主要存在于谷物和動(dòng)物副產(chǎn)品中，OTA與血漿蛋白緊密結(jié)合，在動(dòng)物組織中半衰期較長(zhǎng)。OTA的同系物有OTB、OTC和OTD，其中OTA的毒性最強(qiáng)且分布最廣。OTA的主要靶器官是腎臟，其與血清中的蛋白質(zhì)緊密結(jié)合并在腎臟中積累，可擾亂腎小管細(xì)胞中蛋白質(zhì)的合成等生物過(guò)程并引起腎小管間質(zhì)纖維化，產(chǎn)生腎毒性。犬對(duì)OTA較敏感，OTA中毒的臨床癥狀包括厭食、體重減輕、嘔吐、血性腹瀉和脫水等。

ZEA是一種非甾體雌激素毒素，主要由幾種鐮刀菌屬產(chǎn)生，其結(jié)構(gòu)與雌激素類似，在體內(nèi)可通過(guò)與胞質(zhì)雌激素受體結(jié)合發(fā)揮雌激素作用。雄性和雌性犬都會(huì)受到ZEA毒性的影響。雌性寵物暴露于ZEA后，輸卵管和子宮會(huì)出現(xiàn)增生和積水，雄性寵物暴露于ZEA會(huì)導(dǎo)致精子生成量減少。寵物食品中約1 mg/kg的ZEA可能導(dǎo)致不孕，影響排卵、受孕、著床、胎兒生長(zhǎng)和新生兒的生存能力。

FBs由鐮刀菌產(chǎn)生，目前已鑒定出超過(guò)15種形式，其中FB1，F(xiàn)B2和FB3較常見(jiàn)，F(xiàn)B1在食品中占FBs總含量的70%∼80%。肝臟和腎臟被證明是FBs急性暴露的主要靶器官，而FBs慢性暴露則影響免疫系統(tǒng)。FBs可能通過(guò)破壞鞘脂代謝，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞損傷、凋亡、壞死和代償性增生。

2 寵物食品中霉菌毒素的檢測(cè)方法

目前，有多種寵物食品中霉菌毒素的檢測(cè)方法，其中高效液相色譜法（High performance liquid chromatography， HPLC）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid chromatography tandem mass spectrometry， LC-MS/MS）具有高靈敏度和高選擇性，能夠同時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)多種霉菌毒素的含量。

Castaldo等開發(fā)了超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法（Ultra-high performance liquid chromatography-Q-orbitrap high resolution mass spectrometry， UHPLC-Q-Orbitrap HRMS），可以同時(shí)測(cè)定寵物食品中28種霉菌毒素。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）具有操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，適合大量樣品的初步篩查。因此，許多調(diào)查寵物食品中霉菌毒素發(fā)生情況的研究是基于ELISA試劑盒測(cè)定其中的霉菌毒素污染水平，然而，多數(shù)霉菌毒素檢測(cè)試劑盒只能實(shí)現(xiàn)單一種類霉菌毒素的測(cè)定。

此外，薄層色譜法靈敏度相對(duì)較低，逐漸被其他檢測(cè)方法替代。近年來(lái)，一些研究者建立了基于核酸適配體和生物傳感器的霉菌毒素檢測(cè)方法，但尚未形成標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)體系，在實(shí)際推廣應(yīng)用中受到限制。在實(shí)際檢測(cè)中，常根據(jù)檢測(cè)需求和條件選擇合適的方法，或者多種方法聯(lián)合使用以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在調(diào)查犬干糧樣品時(shí)，一項(xiàng)研究使用ELISA方法廣泛篩查樣本中霉菌毒素，同時(shí)采用基于免疫親和凈化的HPLC方法進(jìn)行確證分析。表1總結(jié)了《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》中推薦的寵物食品中霉菌毒素的檢測(cè)方法，標(biāo)準(zhǔn)的霉菌毒素檢測(cè)方法以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法為主。

表1 《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》中推薦的寵物食品中霉菌毒素的檢測(cè)方法Table 1 Methods for the detection of mycotoxins in pet food recommended in the Pet Feed Hygiene Regulations

3 寵物食品中霉菌毒素的污染狀況

在世界范圍內(nèi)，多項(xiàng)研究報(bào)道了寵物食品中霉菌毒素的調(diào)查結(jié)果。與貓糧相比，犬糧中谷物含量更高，霉菌毒素污染的可能性更大。一項(xiàng)南非的研究分別檢測(cè)了犬糧和貓糧中幾種主要霉菌毒素的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，貓糧樣本中AFB1的平均檢出水平比犬糧樣本高，優(yōu)質(zhì)品牌貓糧中AFB1的平均檢出水平為125.02 μg/kg?；?4份貓糧樣品的調(diào)查結(jié)果顯示，DON和FB在貓糧樣品中的污染率較高，檢出率分別為80%和96%，說(shuō)明貓糧中霉菌毒素的污染同樣需要重點(diǎn)關(guān)注。在奧地利市場(chǎng)收集的76份犬干糧中，檢出率最高的霉菌毒素是DON（83%），其次是ZEA（47%）和FBs（42%）。

波蘭研究人員在49份寵物干糧（犬糧25份，貓糧24份）中全部檢測(cè)到DON和ZEA污染，超過(guò)80%的樣品被T-2毒素或HT-2毒素污染，該研究說(shuō)明多種寵物食品中多種霉菌毒素同步污染的現(xiàn)象突出。同樣，在64份貓糧樣品中霉菌毒素共存的發(fā)生率為78%?；?00份犬糧的調(diào)查結(jié)果顯示，50%的樣品同時(shí)受到AFs，ZEA和FBs的共同污染，尤其是ZEA與FBs的共同污染。有研究報(bào)道了我國(guó)寵物食品中霉菌毒素的污染狀況。2017年，安琪酵母股份有限公司檢測(cè)了10份犬糧樣品中AFB1，ZEA和DON的污染狀況，其中ZEA和DON的檢出率為100%，AFB1的檢出率為90%。在2018年調(diào)查的寵物糧中，ZEA與DON的檢出率為100%，AFB1的檢出率為66.7%，ZEA，DON和AFB1在寵物糧樣品中的平均檢測(cè)水平分別為107.19 μg/kg，309.78 μg/kg和0.55 μg/kg。

2020年廣東省54份寵物食品的調(diào)查結(jié)果顯示，樣本中AFB1，ZEA，DON和FB1的檢出率均約50%，其中AFB1污染情況極其嚴(yán)重，最高檢出水平達(dá)242.7 μg/kg，幾乎全部樣本中AFB1水平超過(guò)了《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》的限量水平，ZEA的最高污染水平也超過(guò)了《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》的限量水平。收集了32份犬干糧樣品，通過(guò)LC-MS/MS法測(cè)定其中的AFB1，AFG1，ZEA，DON，T-2，白僵菌素（BEA），柑橘毒素（CIT），OTA，F(xiàn)B1含量，結(jié)果表明，96.9%的樣品受到至少3種不同類型霉菌毒素的污染，AFB1與BEA的檢出率>90%，AFB1的檢出水平在30.3~242.7 μg/kg，全部超過(guò)《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》的限量水平。對(duì)我國(guó)市場(chǎng)進(jìn)口品牌貓糧和犬糧中霉菌毒素測(cè)定分析的結(jié)果顯示，超過(guò)90%的樣本受到2種及以上霉菌毒素污染，且與寵物罐頭食品相比，寵物干糧霉菌毒素污染水平更高。

4 我國(guó)寵物食品中霉菌毒素監(jiān)管現(xiàn)狀

依據(jù)《飼料和飼料添加劑管理?xiàng)l例》（國(guó)務(wù)院令第609號(hào)），我國(guó)對(duì)寵物食品制定了系列規(guī)范性文件，包括《寵物飼料管理辦法》《寵物飼料生產(chǎn)企業(yè)許可條件》《寵物飼料標(biāo)簽規(guī)定》《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》《寵物配合飼料生產(chǎn)許可申報(bào)材料要求》等規(guī)范性文件（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第20號(hào)）?！秾櫸镲暳闲l(wèi)生規(guī)定》自2018年6月起施行，與《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078—2017）類似，《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》中同樣限定了6類霉菌毒素的限量水平，比畜禽飼料霉菌毒素的限量水平更嚴(yán)格，但與食品中霉菌毒素的限量水平相比，寵物食品中限量要求較寬松（寵物食品中赭曲霉毒素A的限量水平更嚴(yán)格，表2）。

對(duì)于寵物食品中霉菌毒素的日常監(jiān)管，自2016年起，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部對(duì)寵物食品開展產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)，從監(jiān)管角度考慮，寵物食品歸屬于飼料類別，因此，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局每年制定飼料安全質(zhì)量監(jiān)管工作方案及任務(wù)，其中包含寵物食品。

在監(jiān)測(cè)過(guò)程中，將寵物食品分為寵物配合飼料、寵物預(yù)混合飼料和寵物零食，對(duì)抽取到的寵物配合飼料和寵物零食樣品進(jìn)行霉菌毒素含量測(cè)定，并公開監(jiān)測(cè)結(jié)果。

目前，市場(chǎng)上部分企業(yè)對(duì)霉菌毒素的危害認(rèn)識(shí)不足，缺乏有效的質(zhì)量控制措施，且隨著跨境電商等新興銷售渠道的出現(xiàn)，給監(jiān)管帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)?；谶@些挑戰(zhàn)，需進(jìn)一步完善監(jiān)管法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)對(duì)寵物食品生產(chǎn)、銷售等環(huán)節(jié)的監(jiān)管力度，同時(shí)建立健全質(zhì)量追溯體系，確保問(wèn)題產(chǎn)品能夠及時(shí)召回，此外，可以加強(qiáng)國(guó)際合作與交流，借鑒國(guó)外先進(jìn)的監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)和檢測(cè)技術(shù)。

表2 寵物食品、飼料和食品中霉菌毒素限量水平Table 2 Mycotoxin limit levels in pet food， feed and food

5 總結(jié)

寵物食品成分復(fù)雜，基質(zhì)干擾嚴(yán)重，需研發(fā)快速、準(zhǔn)確、靈敏的多種霉菌毒素同步檢測(cè)方法，提高檢測(cè)的自動(dòng)化水平，降低檢測(cè)成本，加強(qiáng)生物傳感器等新型檢測(cè)技術(shù)的研究和應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。加強(qiáng)寵物食品的監(jiān)管是降低霉菌毒素對(duì)寵物健康危害的主要手段之一。此外，《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》中霉菌毒素的限量水平不是以犬、貓為靶動(dòng)物進(jìn)行的毒性研究得出，需制定更精細(xì)準(zhǔn)確的限量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)寵物行業(yè)的高質(zhì)量和持續(xù)發(fā)展。

來(lái)源：動(dòng)物經(jīng)濟(jì)學(xué)報(bào)